肉的宰后嫩化注意归因于肌原人造食物纤维板设计的破碎，肌原人造食物纤维板设计是由内源性球血清酶淀粉水解发应酶生物生物降解肌原人造食物纤维板和細胞核骨架球血清酶出现的。与一百多年来直到是注意的点的钙球血清酶酶各种不同，胱天球血清酶酶（caspases）近将成为感爱好的话语题。胱天球血清酶酶在細胞核凋亡的运行时段起着至关首要的实力，里面caspase-3在人死了球血清酶淀粉水解发应中的实力是各个面和缜密的，因而比较适合进一次实验。S-亚硝基化进行调试钙保持、正能量神经肿瘤细胞膜代谢、球血清酶质生物生物降解和細胞核凋亡来调试口感，比如嫩度和持水实力。项目前期实验发现S-亚硝基化能够 降低忽略线粒体的caspase-3级联发应，这能够是背部肌肉細胞核凋亡和牛羊肉高质量转变的因为。caspase-3的实验重心是其与細胞核凋亡的相互关系，尽管，特少有实验浅议S-亚硝基化调试caspase-3的措施。

2024年9月由苏州农林综合大学张万刚教学团队图片在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱生物技术为该研究提供了亚硝基化掩盖组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

汉语关键词：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

杂志：Journal of Agricultural and Food Chemistry

202几年影响力指数公式：5.7

刊发时光：2024年9月

潜在客户部门：南京农业大学

科研村料：蛋白

拜谱打造水平：亚硝基化修饰组学

技术水平交通路线：

一、探讨结果显示

01.Caspase-3化学活化

现尚不非常清楚NO对caspase-3的抑设计制做用做用有无归因于NO介导的S-亚硝基化，多种质量浓度均值的GSNO身为外源性NO供应商，以引发caspase-3的休外S-亚硝基化。最终反映，与并没有GSNO的组想必，100、200和400μM GSNO组的caspase-3灵亲水性特殊减小（图1），与原先新闻报导不一样。GSNO治疗减小caspase-3灵亲水性的不确定性主观原因仍尚待揭示。

图1 有所不同有机废气浓度的GSNO清理对caspase-3活性氧的决定

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化限度

的学习Caspase-3的亚硝基化度上，以说明GSNO对Caspase-3的发应性。经GSNO处里后，检则到caspase-3血清S-亚硝基化构造添加（图2）。这样没想到证实，外源性GSNO致力于可成功失败诱导型caspase-3的身体S-亚硝基化。使人惊愕的是，在不会GSNO有的参考组中检则到另一个忽闪的S-亚硝基化带，这证实caspase-3将会發生内源性的S-亚硝基化。除此之外，本的学习中caspase-3的S-亚硝基化度上较高，而caspase-3的活性酶类影响，这与刚刚的的学习统一。或许，caspase-3的特异形S-亚硝基化修饰语位点尚不明确，还必须要 进步骤的探秘。

图2 GSNO进行处理对caspase-3S-亚硝基化情况的关系

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化掩盖组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的字段。海蓝记号的字段数字代表S-亚硝基化肽，桔红色记号的C数字代表S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱分析

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3可降解结核蛋白

结血清是是一种最主要的細胞骨架血清，在保持肌細胞设备构造的设备构造完好性和膨胀性管理方面起着最主要效果，论述S-亚硝基化caspase-3对结血清溶解的太敏感度高和理性含有最主要实际意义。与Std（未用胱天血清酶-3和GSNO孵育的初使肌氯纶血清）组相比之下，0 μM GSNO组（肌原氯纶和caspase-3的孵育，无GSNO）的完好结血清硫纯度更为看不出削减，表示caspase-3对结血清含有不确定的血清油脂水解程度。在GSNO孵育后，完好结血清的硫纯度看不出增大（P < 0.05）。最后，当GSNO酸度身高时，完好结血清的硫纯度持续时间调整（P < 0.05）（图5）。这样发掘表示，SNO淡化的caspase-3以水平面根据的的方法仰制结血清的溶解。

图5.S-亚硝基化caspase-3分解结血清

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3吸附肌钙蛋清-T

肌钙核球淀粉酶酶-T (TnT)是原肌球核球淀粉酶酶转换提供腹肌弯曲的细条的必要肌原人造植物纤维素核球淀粉酶酶。TnT的光化学化学溶解有特点是检查到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化标准下，caspase-3对TnT的光化学化学溶解情况报告提示6提示，与Std组（可含caspase-3和GSNO的肌原人造植物纤维素）相对，caspase-3组中30 kDa TnT情节相关系数加强，是因为caspase-3进行了TnT的光化学化学溶解，显然，caspase-3与GSNO的孵育引致30 kDa TnT减低。在100和200 μM GSNO组相互没了检查到特别的差异性(P > 0.05)，而当GSNO的有机废气浓度以达到400 μM 时，该情节相关系数缩减(P < 0.05)。等察觉到是因为了SNO装饰的caspase-3对TnT光化学化学溶解的阻止效果。结核球淀粉酶酶和TnT是caspase-3的神经敏感底物，而GSNO进行处理减低caspase-3的亲水性能够引致肌原人造植物纤维素核球淀粉酶酶光化学化学溶解层面减低。综合上面的所论，NO引导的S-亚硝基化行进行装饰半胱氨酸残基来转换caspase-3的亲水性，继而进一大步不良会影响其对结核球淀粉酶酶和TnT的核球淀粉酶酶淀粉水解能力素质，于是不良会影响鸡肉好品质。

图6. S-亚硝基化caspase- 3可降解肌钙核蛋白-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、总结ppt

本科学研究致力于论述S-亚硝基化对caspase-3修饰语语的损害还有最后对羊肉肌原仟维材料身体外挥发的损害。球淀粉酶S-亚硝基化还可以修饰语语caspase-3的半胱氨酸残基，而导至caspase-3化学活化大幅度降低，进1步能够抑制了其对羊肉肌原仟维材料球淀粉酶的球淀粉酶油脂水解本事。

三、拜谱个人心得体会

定性分析主要采用了酶活定性分析，亚硝基化突显组学定性分析，WB等检侧伎俩，感觉血清S-亚硝基化能否突显caspase-3的半胱氨酸残基，这造成了caspase-3几丁质酶的消减，并举的一步可抑制了其对牛肉片肌原纤维棉血清的血清水解反应力。本定性分析为解释一下血清质亚硝基化对肉肥的调节作用机能供应好几个个新的第三视角。

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可以参考论文：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663